NY∕T 3280.3-2018 病毒微生物农药 棉铃虫核型多角体病毒 第3部分：棉铃虫核型多角体病毒悬浮剂(农业)
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0.77 |
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13 |
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日期： |
2021-12-27 |
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ICS 65.100,B 17 NY,中华人民共和国农业行业标准,NY/T 3280 . 3一2018,病毒微生物农药棉铃虫核型多角体病毒,第3部分:棉铃虫核型多角体病毒悬浮剂,Virus-basedinsecticides-H elicoverpa armigera nucleopolyhedrovirus (HearNPV )一,Part 3 : Helicoverpa armigera nucleopolyhedrovirus suspension concentrate (SC),2018 - 07 - 27 发布2018 - 12 - 01 实施,中华人民共和国农业农村部发布,目。吕,NY/ T 3280 ((病毒微生物农药棉铃虫核型多角体病毒》分为3 个部分:,一一第1 部分:棉铃虫核型多角体病毒母药;,一一第2 部分: 棉铃虫核型多角体病毒水分散粒剂;,一一第3 部分:棉铃虫核型多角体病毒悬浮剂,本部分为NY/ T 3280 的第3 部分,本部分按照GB/ T 1. 1-2009 给出的规则起草,本部分由农业农村部种植业管理司提出并归口,NY/T 3280. 3-2018,本部分起草单位:农业农村部农药检定所、武汉中科威睿农业科技有限公司、中国科学院武汉病毒,研究所,本部分主要起草人: 类承凤、郭明程、孙修炼、王晓军、肖凤平、张忠信、张楠,I,NY/T 3280. 3-2018,1 范围,病毒微生物农药棉铃虫核型多角体病毒,第3 部分:棉铃虫核型多角体病毒悬浮剂,本部分规定了棉铃虫核型多角,包装、储运、安全和保质期,本部分适用于以,铃虫核型多角体病,下列文件对于,件。凡是不注日期,GB/ T 1601,GB/ T 1604,GB/ T 28137,GB/ T 31737,3 术语和定义,3. 1,棉铃虫核型多角体病毒悬浮剂,concentrate (SC),以棉铃虫核型多角体病毒母药与适宜的载体及分散剂混合均匀的液体制剂,3. 2,病毒包涵体polyhedral incIusion body( Pffi),病毒水平传播的主要载体形式，其结构特征是病毒粒子包埋于蛋白质基质的多角体中,3. 3,生测效价比potency ratio,根据药物的药理和对生物体的作用设计试验，比较样品、标准品引起的生物反应，测定药物效价或,其生物学活性,3.4,1,NY/T 3280.3-2018,菌落形成单位colony forming units( CFU),由单个菌体或聚集成团的多个菌体在固体培养基上生长繁殖所形成的集落。指在琼脂平板上经过,-定温度和时间培养后形成的每一个菌落， 是计算细菌或霉菌数目的单位,3. 5,杂菌菌落总数nwnber of microbial contaminants,将棉铃虫核型多角体病毒悬浮剂样品稀释后涂布在琼脂营养培养基上，所得到的微生物(真菌和细,菌)菌落数之和,4 要求,4. 1 外观,应是可流动、易测量体积的悬浮液体; 存放过程中可能出现沉淀，但摇匀应恢复原状，不应有结块,4. 2 规范项目及指标,棉铃虫核型多角体病毒悬浮剂还应符合表1 的要求,表1 棉铃虫核型多角体病毒悬浮剂控制项目指标,项目指标,病毒包涵体含量， PIB/ mL 二三标不值,生测效价比(标准品LCso/ 待测样品LCso) ， % 二三80,杂茵茵落总数， CFU/ mL 主二1. OXIO',pH 5. 0~7. 5,悬浮率， % 二三80,细度(通过75μ丑试验筛)， % 二三95,倾倒性,倾倒后残余物，% 主二3 .0,洗涤后残余物， % ~O. 5,持久起泡量(1 min 后)， mL 运二30,5 试验方法,5. 1 一般规定,除非另有说明，本标准所用试剂均为分析纯，所述溶液均为水溶液，试验用水为GB/ T 6682 中规定,的三级水,5. 2 抽样,按照GB/ T 1605 中"液体制剂采样"方法进行，用随机数表法确定抽样的包装件，最终抽样量一般,不少于600 mL ,5. 3 病毒毒种的鉴定,通过提取试样中病毒DNA 作为模板，用HearNPV me53 基因和dbρ 基因的特异性引物进行PCR,扩增反应，琼脂糖凝胶电泳检测。当PCR 扩增片段大小约为0 . 5 kb 时，回收扩增片段，并克隆到T 载,体上，用M13 通用引物对克隆后的PCR 产物进行测序，将测序结果分别与棉铃虫核型多角体病毒(G4,株)的me53 基因和dbρ 基因序列进行比对分析，两者一致性均应该大于98 % ，即认定试样中的病毒为,棉铃虫核型多角体病毒,棉铃虫核型多角体病毒有效成分描述参见附录A。棉铃虫核型多角体病毒毒种的鉴定方法按照附,录B 的规定,5. 4 病毒包涵体含量的测定,5.4. 1 方法提要,称取少量的病毒试样，用定量的水稀释成水悬浮液，并稀释至适当倍数后，滴加在血球计数板上，在,2,NY/T 3280.3-2018,毒,病,积,体,量,质,位,单,出,算,计,数,倍,释,稀,及,以,量,数,的,体,涵,包,毒,病,上,板,数,'TgL,阳门m 片血以斗玻据川L 盖-民,根EM 拥州溶,确队LMU 充此,数备制Jm 。及骤样取的设而器O 镜板步式，净下、平液JJ微协定将愤沽,镜晴天移瓶显、1 明'2,微。t 析量量学球拍,1 至A,显量2 分微容光血33 释时,学数444 稀数,光的555 水计,10 mL容量瓶中，加,个病毒包涵体),的病毒悬液,5. 4.4 计算,试样中棉铃,(1),式中:,X j,A,B,5. 4. 5 允许差,病毒包涵体含量,生测效价比(标准品,5……
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